High-Throughput method for ranking the affinity of peptide ligands selected from phage display libraries

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Título

High-Throughput method for ranking the affinity of peptide ligands selected from phage display libraries

Tema

PEPTIDOS
BIOQUIMICA
2008
BIBLIOGRAFÍA NACIONAL QUÍMICA

Abstract

The use of phage display peptide libraries allows rapid isolation of peptide ligands for any target selector molecule. However, due to differences in peptide expression and the heterogeneity of the phage preparations, there is no easy way to compare the binding properties of the selected clones, which operates as a major “bottleneck” of the technology. Here, we present the development of a new type of library that allows rapid comparison of the relative affinity of the selected peptides in a high-throughput screening format. As a model system, a phage display peptide library constructed on a phagemid vector that contains the bacterial alkaline phosphatase gene (BAP) was selected with an antiherbicide antibody. Due to the intrinsic switching capacity of the library, the selected peptides were transferred “en masse” from the phage coat protein to BAP. This was coupled to an optimized affinity ELISA where normalized amounts of the peptide−BAP fusion allow direct comparison of the binding properties of hundreds of peptide ligands. The system was validated by plasmon surface resonance experiments using synthetic peptides, showing that the method discriminates among the affinities of the peptides within 3 orders of magnitude. In addition, the peptide−BAP protein can find direct application as a tracer reagent.

Autor

González-Techera, A.
Umpierrez-Failache, M.
Cardozo, S.
Obal, G.
Pritsch, O.
Last, J.A.
Gee, S.J.
Hammock, B.D.

Fuente

Bioconjugate Chemistry v.19, no. 5, 2008. -- p.993-1000

Editor

ACSPublications

Fecha

2008

Derechos

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Formato

pdf

Idioma

Ingl{es

Tipo

Art{iculo

Identificador

DOI: 10.1021/bc700279y
Fecha de agregación
October 15, 2014
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
,
Citación
González-Techera, A., “High-Throughput method for ranking the affinity of peptide ligands selected from phage display libraries,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed July 14, 2024, https://riquim.fq.edu.uy/items/show/1958.
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