Competitive Selection from Single Domain Antibody Libraries Allows Isolation of High-Affinity Antihapten Antibodies That Are Not Favored in the llama Immune Response

Dublin Core

Título

Competitive Selection from Single Domain Antibody Libraries Allows Isolation of High-Affinity Antihapten Antibodies That Are Not Favored in the llama Immune Response

Tema

INMUNOLOGIA
LLAMAS
ANTICUERPOS
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2011

Abstract

Single-domain antibodies (sdAbs) found in camelids lack a light chain, and their antigen-binding site sits completely in the heavy-chain variable domain (VHH). Their simplicity, thermostability, and ease in expression have made VHHs highly attractive. Although this has been successfully exploited for macromolecular antigens, their application to the detection of small molecules is still limited to a very few reports, mostly describing low-affinity VHHs. Using triclocarban (TCC) as a model hapten, we found that conventional antibodies, IgG1 fraction, reacted with free TCC with a higher relative affinity (IC50 51.0 ng/mL) than did the sdAbs (IgG2 and IgG3, 497 and 370 ng/mL, respectively). A VHH library was prepared, and by elution of phage with limiting concentrations of TCC and competitive selection of binders, we were able to isolate high-affinity clones, KD 0.981.37 nM (SPR), which allowed development of a competitive assay for TCC with an IC50 = 3.5 ng/mL (11 nM). This represents a 100-fold improvement with regard to the performance of the sdAb serum fraction, and it is 100-fold better than the IC50 attained with other antihapten VHHs reported thus far. Despite the modest overall antihapten sdAbs response in llamas, a small subpopulation of high-affinity VHHs is generated that can be isolated by careful design of the selection process

Autor

Tabares-da Rosa, Sofía
Rossotti, Martín
Carleiza, Carmen
Carrion, Federico
Pritsch, Otto M.
Ahn, Ki Chang
Last, Jerold A.
Hammock, Bruce D.

Fuente

Analytical Chemistry v. 83, no 18, 2011. -- p. 7213-7220

Editor

American Chemical Society

Fecha

2011

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Artículo

Identificador

dx.doi.org/10.1021/ac201824z
Fecha de agregación
September 27, 2013
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
, ,
Citación
Tabares-da Rosa, Sofía, “Competitive Selection from Single Domain Antibody Libraries Allows Isolation of High-Affinity Antihapten Antibodies That Are Not Favored in the llama Immune Response,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed April 8, 2020, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/1006.
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