Glutatión transferasas en Echinococcus granulosus: identificación, estudios cinèticos y de expresión

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Título

Glutatión transferasas en Echinococcus granulosus: identificación, estudios cinèticos y de expresión

Tema

INMUNOLOGÍA
ECHINOCOCCUS GRANULOSUS
TESIS DE MAESTRÍA

Abstract

Las glutation transferasas (GSTs) son una superfamilia de protefnas multifuncionales que cumplen funciones esenciales en la detoxificacion de compuestos tanto endogenos como exogenos. Las GSTs pueden ser c1asificadas en cuatro familias, siendo las citosolicas las estudiadas en mayor profundidad. En parasites helmintos se identificaron varias GSTs citosolicas con roles clave para su sobrevida en el hospedero. Asimismo, no solo la actividad detoxificante es importante sino que las GSTs, particularmente las de c1ase Sigma, estan implicadas en procesos de inmunomodulacion a traves de su actividad prostaglandina sintasa. En este sentido, es de nuestro interes caracterizar este grupo de enzimas en el parasito Echinococcus granulosus. Particularmente, este trabajo describe la identificaci6n y c1asificacion de • una nueva GST de E. granulosus (EgGST2), 105 avances en la caracterizacion cinetica de EgGSTl tipificada previamente y por ultimo, 105 estudios de expresion de las tres EgGSTs identificadas al momento. A partir del transcriptoma de larva de E. granulosus publicado se obtuvo la secuencia de EgGST2. En la Seccion I se muestra la tipificacion de EgGST2. Los estudios de funcion catalftica ubican a EgGST2 indudablemente como miembro de la c1ase Sigma. Por otro lade, se presenta el trabajo orientado a la produccion de la protefna recombinante enzimaticamente activa y finalmente se muestra que la protefna se expresa en protoescolex de E. granulosus. La enzima EgGSTl fue previa mente estudiada por nuestro grupo de trabajo donde se demostro que pertenece a la c1ase Mu. Por otro lado, se realizaron estudios bioqufmicos de la enzima recombinante, donde se analizo el panel de actividades que presenta asf como sus parametros enzimaticos. En la Seccion 1\ se presenta la profundizacion de la caracterizacion cinetica de EgGST1. En este contexto, se realizaron estudios de velocidades iniciales y de inhibicion por producto, cuyos resultados muestran que EgGSTl sigue un mecanisme secuencial aleatorio concordante con las GSTs de mamffero de c1ase Mu descritas. Por otro lado, se determine la constante de disociacion para cada uno de 105 sustratos por analisis de union en equilibrio. Finalmente, experimentos de pH permitieron acceder al pKa del tiolato del GSH en el complejo binario enzima - GSH, siendo este resultado acorde con 10 reportado para las GST que presentan una Tyr catalftica. En ultimo lugar, en la Seccion III, se exponen 105 estudios de expresion de las tres GST identificadas al momento en E. granulosus. Primero, se presenta el analisis bioinformatico de las regiones 5' flanqueantes de 105 tres genes donde se identificaron elementos relacionados con la regulacion de enzimas detoxificantes. Por otro lado, se observo que las tres isoformas presentan una expresion diferencial a nivel del ARN • mensajero cuando 105 protoescolex son expuestos a condiciones de estres oxidativo 0 xenobioticos in vitro. Finalmente, se estudio la expresion de las EgGSTs en el contexto de la infeccion secunda ria murina temprana. EI conjunto de estes resultados pretende contribuir al entendimiento de la interrelacion hospedero - parasite a partir del entendimiento del rol biologico de este versatil grupo de enzimas detoxificantes.

Autor

Arbildi Torres, Paula

Editor

Montevideo: UdelaR-Facultad de Química

Fecha

2013

Colaborador

Dra. Fernández, Veronica(Directora de Tesis)

Derechos

Información sobre Derechos de Autor

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Formato

Papel

Extent

161 p.

Idioma

Español

Tipo

Tesis

Identificador

TM 612.017 ARB
Fecha de agregación
March 14, 2014
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Citación
Arbildi Torres, Paula, “Glutatión transferasas en Echinococcus granulosus: identificación, estudios cinèticos y de expresión,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed March 3, 2021, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/1312.
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