Novel bifunctional epoxy/thiol-reactive support to immobilize thiol containing proteins by the epoxy chemistry

Dublin Core

Título

Novel bifunctional epoxy/thiol-reactive support to immobilize thiol containing proteins by the epoxy chemistry

Tema

PROTEINAS
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA

Abstract

In this manuscript, we present a new bifunctional support containing epoxide and thiol-reactive groups for its use in protein immobilization. In a first step, the proteins are reversibly immobilized by reaction of its thiol groups with the thiol-reactive groups of the support under mild experimental conditions (pH 7.0, 24 °C). Then, the remaining epoxides of the support can form irreversible bonds with nucleophile surface groups of the already immobilized protein in a rapid way. The partial derivatization of EP-Sepabeads (a commercial matrix containing 120 ímol epoxy groups/g drained support) was optimized, using dithiotreitol (DTT) as thiolating agent. It was possible to achieve a partial thiolation of the support proportional to the concentration of DTT used (3, 8, and 15 ímol SH groups/g wet support). The remaining epoxide content after the thiolation treatment was high (e.g., nearly 70% for the highest thiolation degree). High immobilization yields were obtained for the three model enzymes selected (60% for Penicillin G acylase, 65% and 100% for K. lactis and E. coli â-galactosidase, respectively). In all cases, no significant immobilization onto an unmodified epoxy support was found, thus demonstrating that the first step of attachment takes place through thiol-disulfide exchange reactions. In the case of the bifunctional support, progressive formation of enzymesupport attachments involving the epoxy groups was showed by the irreversible covalent attachment of the proteins on the support. The promotion of this multipoint covalent immobilization required long incubation periods at basic pH values.

Autor

Grazú, Valeria
Abian, O.
Mateo, C.
Batista-Viera, Francisco
Fernandez-Lafuente, R.
Guisan, J.M.

Fuente

Biomacromolecules v. 4, no. 6, 2003. -- p. 1495-1501

Editor

American Chemical Societ

Fecha

2003

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Artículo

Identificador

DOI: 10.1021/bm034262
Fecha de agregación
March 4, 2015
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
Citación
Grazú, Valeria, “Novel bifunctional epoxy/thiol-reactive support to immobilize thiol containing proteins by the epoxy chemistry,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed March 5, 2021, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/2454.
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