Enzyme reduction on solid phase as a tool for the reversible immobilization of yeast B-galactosidase onto a thiol reactive support.

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Título

Enzyme reduction on solid phase as a tool for the reversible immobilization of yeast B-galactosidase onto a thiol reactive support.

Tema

ENZIMAS
MICROBIOLOGIA
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2004

Abstract

Reduction of disulfide bonds in Kluyveromyces lactis β-galactosidase was assessed using solid phase reducing agents synthesized on three different supports (agarose, Toyopearl® and Eupergit®), provided with mercaptohydroxypropyl–ether groups. These agents are insoluble supports provided with thiol moieties as the reducing groups. The reduction performed on solid phase allowed a three-fold increase in the enzyme’s initial SH group content; the same result was achieved with dithiothreitol in solution. However, 10-fold less μmoles of SH groups per mg of protein were needed to perform the reduction of β-galactosidase with these solid phase reducing agents than the amount of SH groups required for reduction in solution. After the reduction process, the remaining content of SH groups on the solid phases was determined and found to be 60% for thiopropyl–agarose and thiopropyl–Toyopearl and 40% for thiopropyl–Eupergit. The reduced enzyme was reversibly immobilized on to agarose activated with thiol-reactive structures, thiolsulfinate (TSI) moieties, achieving high immobilization yields: more than 60% (for the enzyme reduced with dithiotreitol or thiopropyl–agarose) and more than 40% (for the enzyme reduced with thiopropyl–Toyopearl or thiopropyl–Eupergit). Half life at 45 °C of the resulting derivatives varied from 90 min (enzyme reduced with dithiothreitol) to 30 min (enzyme reduced with thiopropyl–Toyopearl and thiopropyl–Eupergit). The percentage of lactolysis at 25 °C was similar for all the derivatives, 90% after 2 h of reaction.

Autor

Grazú, Valeria
Cuadra, K

Fuente

Enzyme and Microbial Technology v. 35, no. 2-3, 2004. -- p. 203-209

Editor

Elsevier

Fecha

2004

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Artículo

Identificador

doi:10.1016/j.enzmictec.2004.04.008

Document Item Type Metadata

Original Format

PDF
Fecha de agregación
April 21, 2015
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
,
Citación
Ovsejevi, Karen, “Enzyme reduction on solid phase as a tool for the reversible immobilization of yeast B-galactosidase onto a thiol reactive support.,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed April 17, 2021, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/2836.
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