Streamlined method for parallel identification of single domain antibodies to membrane receptors on whole cells

Dublin Core

Título

Streamlined method for parallel identification of single domain antibodies to membrane receptors on whole cells

Tema

ANTICUERPOS
RECEPTOR DE LA CELULA
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2015

Abstract

Background

Owing to their minimal size, high production yield, versatility and robustness, the recombinant variable domains (nanobodies) of camelid single chain antibodies are valued affinity reagents for research, diagnostic, and therapeutic applications. While their preparation against purified antigens is straightforward, the generation of nanobodies to difficult targets such as multi-pass or complex membrane cell receptors remains challenging. Here we devised a platform for high throughput identification of nanobodies to cell receptor based on the use of a biotin handle.
Methods

Using a biotin-acceptor peptide tag, the in vivo biotinylation of nanobodies in 96 well culture blocks was optimized allowing their parallel analysis by flow cytometry and ELISA, and their direct use for pull-down/MS target identification.
Results

The potential of this strategy was demonstrated by the selection and characterization of panels of nanobodies to Mac-1 (CD11b/CD18), MHC II and the mouse Ly-5 leukocyte common antigen (CD45) receptors, from a VHH library obtained from a llama immunized with mouse bone marrow derived dendritic cells. By on and off switching of the addition of biotin, the method also allowed the epitope binning of the selected Nbs directly on cells.
Conclusions

This strategy streamlines the selection of potent nanobodies to complex antigens, and the selected nanobodies constitute ready-to-use biotinylated reagents.
General significance

This method will accelerate the discovery of nanobodies to cell membrane receptors which comprise the largest group of drug and analytical targets.

Autor

Rossotti, Martín
Tabares, Sofía
Alfaya, Lucía
Leizagoyen, Carmen
Moron, Gabriel

Fuente

Biochimica et Biophysica Acta v. 1850, no. 7, 2015. -- p. 1397-1404

Editor

Elsevier

Fecha

2015

Derechos

Información sobre Derechos de Autor

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Artículo

Identificador

doi:10.1016/j.bbagen.2015.03.009

Document Item Type Metadata

Original Format

PDF
Fecha de agregación
March 15, 2016
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
,
Citación
Rossotti, Martín, “Streamlined method for parallel identification of single domain antibodies to membrane receptors on whole cells,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed August 20, 2019, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/3773.
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