Streamlined method for parallel identification of single domain antibodies to membrane receptors on whole cells
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Abstract
Owing to their minimal size, high production yield, versatility and robustness, the recombinant variable domains (nanobodies) of camelid single chain antibodies are valued affinity reagents for research, diagnostic, and therapeutic applications. While their preparation against purified antigens is straightforward, the generation of nanobodies to difficult targets such as multi-pass or complex membrane cell receptors remains challenging. Here we devised a platform for high throughput identification of nanobodies to cell receptor based on the use of a biotin handle.
Methods
Using a biotin-acceptor peptide tag, the in vivo biotinylation of nanobodies in 96 well culture blocks was optimized allowing their parallel analysis by flow cytometry and ELISA, and their direct use for pull-down/MS target identification.
Results
The potential of this strategy was demonstrated by the selection and characterization of panels of nanobodies to Mac-1 (CD11b/CD18), MHC II and the mouse Ly-5 leukocyte common antigen (CD45) receptors, from a VHH library obtained from a llama immunized with mouse bone marrow derived dendritic cells. By on and off switching of the addition of biotin, the method also allowed the epitope binning of the selected Nbs directly on cells.
Conclusions
This strategy streamlines the selection of potent nanobodies to complex antigens, and the selected nanobodies constitute ready-to-use biotinylated reagents.
General significance
This method will accelerate the discovery of nanobodies to cell membrane receptors which comprise the largest group of drug and analytical targets.
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Document Item Type Metadata
Original Format
- Fecha de agregación
- March 15, 2016
- Colección
- Bibliografía Nacional Química
- Tipo de Elemento
- Document
- Etiquetas
- Anticuerpos, Receptor de la celula
- Citación
- Rossotti, Martín, “Streamlined method for parallel identification of single domain antibodies to membrane receptors on whole cells,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed March 28, 2024, https://riquim.fq.edu.uy/items/show/3773.
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