Comparison of three anti-hapten VHH selection strategies for the development of highly sensitive immunoassays for microcystins

Dublin Core

Título

Comparison of three anti-hapten VHH selection strategies for the development of highly sensitive immunoassays for microcystins

Tema

CIANOBACTERIAS
MICROCISTINAS
INMUNOENSAYOS
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2017

Abstract

Owing to their reproducibility, stability, and cost-effective production, the recombinant variable domains of heavy-chain-only antibodies (VHHs) are becoming a salient option as immunoassay reagents. Recently, there have been several reports describing their application to the detection of small molecules (haptens). However, lacking the heavy-light chain interface of conventional antibodies, VHHs are not particularly apt to bind small analytes and failures are not uncommon. Here we describe the construction of a VHH phage display library against the cyanobacterial hepatotoxin microcystin LR and its selection using competitive panning and two novel panning strategies. The outcome of each strategy was evaluated by a large-scale screening using in vivo biotinylated nanobodies. The three methods selected for different nonoverlapping subsets of VHHs, allowing one to optimize the immunodetection of the toxin. The best results were obtained by promoting the isolation of VHHs with the slowest koff (off-rate selection). Among these, the biotinylated nanobody A2.3 performed in ELISA with excellent recovery and high sensitivity, IC50 = 0.28 μg/L, with a limit of detection that is well below the most rigorous guidelines for the toxin. While it may be case-specific, these results highlight the importance of exploring different panning strategies to optimize the selection of antihapten nanobodies.

Autor

Pírez Schirmer, Macarena
Badagian, Natalia
Rossotti, Martín
Leizagoyen, Carmen
González Sapienza, Gualberto.

Fuente

Analytical Chemistry  v. 89, no. 12, 2017. -- p. 6800-6806

Editor

ACS

Fecha

2017

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglès

Tipo

Artículo

Identificador

DOI: 10.1021/acs.analchem.7b01221

Document Item Type Metadata

Original Format

PDF
Fecha de agregación
March 16, 2018
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
, ,
Citación
Pírez Schirmer, Macarena, “Comparison of three anti-hapten VHH selection strategies for the development of highly sensitive immunoassays for microcystins,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed November 19, 2019, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/4888.
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