Recombinant, Fluorescent, Peptidomimetic Tracer for Immunodetection of Imidaclothiz

PEPTIDOS

INMUNOLOGIA

ANTIGENOS

CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION

ANTICUERPOS MONOCLONALES

BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA

2018

Peptidomimetic and anti-immunocomplex peptides, which can be readily isolated from a phage-display library, have shown great potential for small-molecule immunoassay development because they typically improve the sensitivity and avoid the use of chemical haptens as coatings or tracer antigens. However, phage-borne peptides are unconventional immunoassay reagents, which greatly limits their use in commercial applications, and require secondary reagents for detection. In order to overcome these limitations, we used C2-15, a peptidomimetic of imidaclothiz, as a model peptide fused to emerald-green fluorescent protein (EmGFP) at the N-terminus (C2-15-EmGFP) and C-terminus (EmGFP-C2-15) to generate novel fluorescent-peptide tracers. Both recombinant fluorophores reacted with similar affinity to the anti-imidaclothiz monoclonal antibody 1E7, but because of its higher expression, C2-15-EmGFP was chosen to develop a competitive magnetic-separation fluorescence immunoassay (MSFIA). After a competitive step with the analyte, the C2-15-EmGFP–antibody complex bound to the magnetic beads was separated with a magnet, and because of the fast dissociation of the peptide–antibody interaction, the fluorescence signal was detected following the spontaneous dissociation of the complex in fresh buffer. The concentration of imidaclothiz causing the 50% inhibitory concentration (IC50) was 11.00 ng mL–1, and the MSFIA performed with excellent recovery and had a good correlation with high-performance liquid chromatography in different matrices.

Analytical Chemistry v. 90, no 23, 2018. -- p. 13996-14002

American Chemical Society

2018

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Artículo

DOI: 10.1021/acs.analchem.8b03685

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