A-alquil-B-hidroxiésteres quirales : ampliando el repertorio de biocatalizadores hacia las síntesis enantiodivergentes

BIOCATALISIS

REDUCTASAS

ANTI-PRELOG

A-ALQUIL-B-HIDROXIESTERES

URUGUAY

TESIS

TESIS DE MAESTRIA

Los a-alquil-~-hidroxiesteres quirales son sintones de particular yersatilidad en estrategias sinteticas ya que presentan dos estereocentros en una molecula con muchas posibilidades de derivatizaci6n. La sintesis biocatalitica de los mismos por reducci6n del a-alquil-~-cetoester precursor resulta un metodo muy conveniente para su obtenci6n. Sin embargo no se cuenta aun con biocatalizadores que permitan acceder en forma general y econ6mica a todos los is6meros 6pticos. La mayoria de los biocatalizadores reportados siguen la regia de Prelog, permitiendo acceder s610 a los is6meros con configuraci6n 3S. El objetivo del presente trabajo consisti6 en la identificaci6n de reductasas con actiyidad anti Prelog y el desarrollo de cepas recombinantes que expresaran las mismas de modo de completar el espectro de biocatalizadores disponibles para la sintesis de a-alquil-~-hidroxiesteres quirales. Para lograr identificar nuevas enzimas que permitieran construir estos biocatalizadores, se desarro1l6 un metoda rflpido de screening para la identificaci6n de genes correspondientes a enzimas con actividad reductasa. Se utiliz6 como modelo la cepa Paucimonas lemoignei, la cual expresa una ~-cetoester reductasa con actividad anti Prelog, aunque no se conoce el gen que la codifica. Utilizando este metodo fueron identificados genes que codifican para posibles ~-cetoester reductasas, uno de los cuales fue clonado y expresado en diyersas cepas de E. coli. Las cepas recombinantes generadas fueron utilizadas en diversos ensayos de biotransformaci6n con el objetivo de caracterizar su especificidad de sustrato y su diastero y enantioselectividad. Uno de los biocatalizadores desarrollados present6 actividad ~-cetoester reductasa sobre todos los a-alquil-B-cetoesteres utilizados como sustratos, exhibiendo actiyidad anti Prelog en la reducci6n de a-alil y a-propargil acetoacetato de etilo. Esta cepa constituye el primer biocatalizador de celula entera para la sintesis de ami (2R, 3R) a-alquil-~-hidroxiesteres, ampliando el repertorio de biocatalizadores disponibles para la sintesis de ahidroxiesteres quirales. El metodo desarrollado se podnl utilizar en el futuro para la busqueda de nuevas ~-cetoester reductasas de interes para biocataJ.isis.

Facultad de Química

UdelaR

2007

Dra. Rodríguez, Sonia (Directora de Tesis)

Información sobre Derechos de Autor

(Por favor lea este aviso antes de abrir los documentos u objetos)

La legislación uruguaya protege el derecho de autor sobre toda creación literaria, científica o artística, tanto en lo que tiene que ver con sus derechos morales, como en lo referente a los derechos patrimoniales con sujeción a lo establecido por el derecho común y las siguientes leyes (LEY 9.739 DE 17 DE DICIEMBRE DE 1937 SOBRE PROPIEDAD LITERARIA Y ARTISTICA CON LAS MODIFICACIONES INTRODUCIDAS POR LA LEY DE DERECHO DE AUTOR Y DERECHOS CONEXOS No. 17.616 DE 10 DE ENERO DE 2003, LEY 17.805 DE 26 DE AGOSTO DE 2004, LEY 18.046 DE 24 DE OCTUBRE DE 2006 LEY 18.046 DE 24 DE OCTUBRE DE 2006)

ADVERTENCIA - La consulta de este documento queda condicionada a la aceptación de las siguientes condiciones de uso: Este documento es únicamente para usos privados enmarcados en actividades de investigación y docencia. No se autoriza su reproducción con fines de lucro. Esta reserva de derechos afecta tanto los datos del documento como a sus contenidos. En la utilización o cita de partes debe indicarse el nombre de la persona autora.

Papel

72 p.

Español

Tesis

TM 577.15 PAN.

Uruguay