Identificación de interactores in vivo de la proteína FhaA de Mycobacterium tuberculosis

MYLOBATERIUM TUBERCULOSIS

PROTEOMICA

CROSSLINCING IN VIVO

QUÍMICA ANALÍTICA

Mycobacterium tuberculosis , el agente etiológico de la tuberculosis, es la se gunda causa de muerte por un agente infeccioso a nivel mu ndial. PknG, una Ser/Thr-quinasa de proteínas, es un factor crucial para la sobrevid a de esta bacteria en el hospedero. Con el fin de elucidar las vías de señalización med iadas por PknG, recientemente estudiamos su interactoma e identificamos nuevos su stratos de esta quinasa. En el presente trabajo nos centramos en una de las proteí nas fosforiladas por PknG: la proteína FhaA. Esta proteína tiene una estructura q ue se asemeja a las proteínas de andamiaje que participan en vías de señalización de eucariotas, con un dominio N- terminal de función desconocida y un dominio C-term inal FHA que reconoce específicamente de treoninas fosforiladas, ambos unidos por una secue ncia de aproximadamente 300 residuos sin estructura definid a. Como primer paso hacia la elucidación del rol de esta proteína nos propusimos la caracterización a nivel molecular de los complejos de señalización formados in vivo por FhaA, así como sus cambios dinámicos frente a diferentes estímulos que simulen el ambiente del hospedero. La estrategia experimental utilizada se basa en la sobre-expresión de FhaA conteniendo una etiqueta (Strep-tag) en Mycobacterium smegmatis en combinación con el entrecruzamiento de proteínas in vivo , purificación por afinidad y espectrometría de masa para obtener una instantánea de los complejos de señalización. Nuestros resultados nos permitieron i dentificar 56 interactores de FhaA, entre los que se incluye el único interactor previa mente reportado [1]. Los nuevos interactores identificados nos permiten postular qu e esta proteína cumple un rol tanto en la síntesis de pared como en la regulació n de la división celular en la micobacteria. Con el fin de evaluar la contribución de la fosfo rilación de FhaA a las interacciones descritas, nos proponemos estudiar el intera

Montevideo: UdelaR-Facultad de Química

2018

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Papel

112 p.

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Tesis

545.2 RIV

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