Purification of native M. vogae and H. contortus tubulin by TOG affinity chromatography

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Título

Purification of native M. vogae and H. contortus tubulin by TOG affinity chromatography

Tema

ANTIHELMINTICOS
CROMATOGRAFIA
M. VOGAE
H. CONTORTUS
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2017

Abstract

Microtubules are non-covalent cylindrical polymers formed by alpha- and beta-tubulin heterodimer units, crucial for cell division, intracellular transport, motility and differentiation. This makes them very attractive pharmacological targets exploited to develop different drugs such as anthelmintics, antifungals, and antineoplastics. In this work, in order to establish an in vitro target-based screen to integrate to the search for new anthelmintics, we explored the extraction of native assembly-competent tubulin from two helminth parasites: Mesocestoides vogae tetrathyridia (syn. corti, Cestoda: Cyclophyllidea), a useful cestode biological model, and Haemonchus contortus, a sheep gastrointestinal nematode of interest in livestock production. For this purpose, a novel tubulin affinity chromatography procedure was employed, based on the binding capacity of TOG (Tumor Overexpressed Gene) domain from MAPs (microtubule-associated proteins). The TOG domain of the protein Stu2 from Saccharomyces cerevisiae fused to GST (glutathione S- transferase) were produced in E. coli, and the immobilized recombinant proteins allowed for native tubulin extraction from parasites. The binding capacity of TOG1 affinity column (3.6%) was estimated using commercial porcine brain tubulin. A total amount of up to 126 μg of M. vogae tubulin was purified, whereas H. contortus tubulin co-eluted with glutamate dehydrogenase enzyme. The identity of tubulins was confirmed by western blotting and mass spectrometry. The abundance of tubulin estimated in M. vogae was 10% soluble extract, which probably could explain differences observed between tubulin purification results of both helminth parasites.

Autor

Munguía, Beatriz
Teixeira, Ramiro
Veroli, Victoria.
Melian, Elisa
Minteguiaga, Mahia.
Señorale, Mario
Marín, Mónica

Fuente

Experimental Parasitology v. 182, 2017. -- p. 37-44

Editor

Elsevier

Fecha

2017

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Articulo

Identificador

DOI: 10.1016/j.exppara.2017.09.025

Document Item Type Metadata

Original Format

PDF
Fecha de agregación
March 8, 2018
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
, , ,
Citación
Munguía, Beatriz, “Purification of native M. vogae and H. contortus tubulin by TOG affinity chromatography,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed June 23, 2018, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/4882.
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