Sortase-Mediated Phage Decoration for Analytical Applications

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Título

Sortase-Mediated Phage Decoration for Analytical Applications

Tema

INMUNOLOGIA
VIRUS
PEPTIDOS
PROTEINAS
ETIQUETADO
BIOPOLIMEROS
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2021

Abstract

Phage-borne peptides and antibody fragments isolated from phage display libraries have proven to be versatile and
valuable reagents for immunoassay development. Due to the lack of convenient and mild-condition methods for the labeling of the phage particles, isolated peptide/protein affinity ligands are commonly removed from the viral particles and conjugated to protein tracers or nanoparticles for analytical use. This abolishes the advantage of isolating ready-to-use affinity binders and creates the risk of affecting the polypeptide activity. To circumvent this problem, we optimized the phage display system to produce phage particles that express the affinity binder on pIII and a polyglycine short peptide fused to pVIII that allows the covalent attachment of tracer molecules employing sortase A. Using a llama heavy chain only variable domain (VHH) against the herbicide 2,4-D on pIII as the
model, we showed that the phage can be extensively decorated with a rhodamine-LPETGG peptide conjugate or the protein
nanoluciferase (Nluc) equipped with a C-terminal LPETGG peptide. The maximum labeling amounts of rhodamine-LPETGG and Nluc-LPETGG were 1238 ± 63 and 102 ± 16 per phage, respectively. The Nluc-labeled dual display phage was employed to develop a phage bioluminescent immunoassay (P-BLEIA) for the detection of 2,4-D. The limit of detection and 50% inhibition
concentration of P-BLEIA were 0.491 and 2.15 ng mL−1, respectively, which represent 16-fold and 8-fold improvement compared to the phage enzyme-linked immunosorbent assay. In addition, the P-BLEIA showed good accuracy for the detection of 2,4-D in spiked samples.

Autor

Ding, Yuan
Chen, He
Li, Jiao
Huang, Lianrun
Song, Guangyue
Li, Zhenfeng
Hua, Xiude
Hammock, Bruce D.
Wang, Minghua

Fuente

Analytical Chemistry, v. 93, n° 34, 2021 .-- pp. 11800-11808.

Editor

American Chemical Society

Fecha

2021

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Artículo

Identificador

10.1021/acs.analchem.1c02322

Document Item Type Metadata

Original Format

PDF
Fecha de agregación
November 24, 2021
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
, , , , ,
Citación
Ding, Yuan, “Sortase-Mediated Phage Decoration for Analytical Applications,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed December 4, 2022, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/6451.
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