Isolation of alpaca anti-hapten heavy chain single domain antibodies for development of sensitive immunoassay

Dublin Core

Título

Isolation of alpaca anti-hapten heavy chain single domain antibodies for development of sensitive immunoassay

Tema

INMUNOLOGIA
INMUNOENSAYO
ALPACAS
ANTICUERPOS
BIBLIOGRAFIA NACIONAL QUIMICA
2012

Abstract

Some unique subclasses of Camelidae antibodies are devoid of the light chain, and the antigen binding site is comprised exclusively of the variable domain of the heavy chain (VHH). Although conventional antibodies dominate current assay development, recombinant VHHs have a high potential as alternative reagents for the next generation of immunoassay. We expressed VHHs from an immunized alpaca and developed a VHH-based immunoassay using 3-phenoxybenzoic acid (3-PBA), a major metabolite of pyrethroid insecticides as a model system. A phage VHH library was constructed, and seven VHH clones were selected by competitive binding with 3-PBA. The best immunoassay developed with one of these VHHs showed an IC50 of 1.4 ng/mL (limit of detection (LOD) = 0.1 ng/mL). These parameters were further improved by using the phage borne VHH, IC50 = 0.1 ng/mL and LOD = 0.01 ng/mL. Both assays showed a similar tolerance to methanol and dimethylsulfoxide up to 50% in assay buffer. The assay was highly specific to 3-PBA and its 4- hydroxylated derivative, 4-hydroxy 3-PBA, (150% cross reactivity) with negligible cross reactivity with other tested structural analogues, and the recovery from spiked urine sample ranged from 80 to 112%. In conclusion, a highly specific and sensitive VHH for 3-PBA was developed using sequences from immunized alpaca and phage display technology for antibody selection

Autor

Kim, Hee-Joo
McCoy, Mark R.
Majkova, Zuzana
Dechant, Julie E.
Gee, Shirley J.
Tabares da Rosa, Sofía
Hammock, Bruce D.

Fuente

Analytical Chemistry v. 84, no. 2, 2012. -- p. 1165-1171

Editor

American Chemical Society

Fecha

2012

Derechos

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Formato

PDF

Idioma

Inglés

Tipo

Artículo

Identificador

dx.doi.org/10.1021/ac2030255

Cobertura

 

 

Document Item Type Metadata

Original Format

PDF
Fecha de agregación
August 14, 2012
Colección
Bibliografía Nacional Química
Tipo de Elemento
Document
Etiquetas
, ,
Citación
Kim, Hee-Joo, “Isolation of alpaca anti-hapten heavy chain single domain antibodies for development of sensitive immunoassay,” RIQUIM - Repositorio Institucional de la Facultad de Química - UdelaR, accessed August 21, 2019, http://riquim.fq.edu.uy/items/show/94.
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